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Western及IP细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western blot，免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(co-IP)。本产品含多种蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度(货号：MA0082)。由于含有较高浓度的TritonX-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

• 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。需自备PMSF。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于培养细胞样品：
  
  • 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100～200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。
    对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100～200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50～100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
    
  • 按照每20毫克组织加入100～200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    
  • 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。